Beckman Coulter也提供了两种强大的细胞分选系统。他们的CyAn ADP流式细胞仪使用3种激光,可实现9色分析。高速的电子和Summit软件的使用可以有效处理1×108个细胞的样品,来分析那些稀有事件,如肿瘤干细胞研究。另一个MoFlo XDP流式细胞仪分析速度为100 000个细胞/s,分选速度为70 000个细胞/s,并且能在高产量的同时保留细胞的活力和功能。这台仪器也具有四通道分选能力,并且分辨率极高,能够让研究者们更好的鉴定和分选他们感兴趣的细胞群体。
细胞分选的新进展
1. 突破分选大小的限制。许多人利用流式细胞仪只要是分选普通培养的哺乳动物细胞,直径一般不超过20微米。但随着流式细胞仪的应用越来越广泛,分选细胞的大小也不应成为限制。美国Union Biometrica公司就提供了市面上唯一的能够分选20-1500 um生物颗粒的流式细胞仪COPAS™系统。COPAS(Complex Object Parametric Analyzer & Sorter)可以分选线虫,果蝇、水螅、蟾蜍、蚊子、斑马鱼的卵和幼虫。COPAS技术的核心,是专利的气流分选装置。这种分选方式非常温和,可以保证收集到的生物活体的活性和完整性,对于后续的培养和分析不会产生任何负面影响,而普通流式细胞仪一般采用电磁场进行分选,会对生物活体产生致命的影响。
以前这种类型的分选是在显微镜下用镊子操作的,所以COPAS系统的出现对于科学家来说是个好消息。现在发育生物学家就能利用COPAS来分选几千条幼虫,来寻找概率很低的遗传变异。你也可以利用它来筛选药物化合物文库。将药物分布在微量滴定板中,每个孔中再放10条线虫。孵育之后通过ReFLx附件将每个孔的东西逐个吸出,再送回流动室中重新分析。
2. 在分析的同时成像。普通的流式细胞术无法观测细胞形态、结构,无法定位荧光信号到特定部位,但是现在这也不再是问题了。美国Amnis公司提供的ImageStream 100系统就很好地解决了这一问题。它将流式多色检测技术和荧光显微镜图像显示技术集中在一个平台上,提供了全新的细胞分析方法。ImageStream系统通过明视野、暗视野、荧光的组合,可以得到每个细胞的6张图像。此外,他们还提供ImageStream光学系统的升级——EDF(extended depth of field)配件,可以增加图像的质量,确保整个细胞清晰。EDF使成像速率快了三倍,不仅提高了成像的质量,还具有共聚焦显微镜的优势。这种能提供图像的流式细胞仪在临床上也有重要作用,可以用高通量荧光原位杂交来检测血液中的肿瘤细胞,比现在的方法灵敏多了。
3. 流式的新帮手。以前,人们只是利用流式细胞仪来看细胞的免疫表型。现在,我们当然不满足于这个,我们还想了解更多复杂的细胞过程,如细胞增殖、活力、凋亡和钙流量。新的荧光染料、新的荧光探针、新的染色方法不断推出,使得新的细胞参数的分析也日益增多。
应用活细胞进行分析是流式细胞术的一个趋势。研究者们往往利用流式细胞仪收集某种细胞群体,然后将其回输到体内,来观察生理上的变化。Invitrogen就提供一种Vybrant® DyeCycle™染料,能在活细胞中进行细胞周期分析。这种染料毒性极小,分选出的细胞还能用于后续的研究,如干细胞鉴定或细胞治疗。BD公司也提供了观察不同细胞群体的工具。Phosflow细胞信号抗体可以让研究者们在一个复杂的多样群体中研究特异表型的细胞,并在单细胞水平上检测多个蛋白的激活状态。