流式细胞仪检测健康儿童T淋巴细胞亚群及其绝对计数的研究
发布日期:2009-07-01 阅读:5905次 查看:[大 中 小]
T淋巴细胞,即CD3阳性细胞群体,介导机体的细胞免疫,可用来判断某些免疫缺陷和自身免疫性疾病。其数值的升高或降低均显示其机体的免疫系统的异常。T淋巴细胞的辅助/诱导细胞亚群,即CD3、CD4双阳性细胞群体,其主要功能是辅助诱导其他免疫细胞,通过分泌的淋巴因子,增强和扩大免疫应答,CD4细胞的减少,必导致免疫功能低下;CD4细胞的过高,可导致免疫功能的亢进。T淋巴细胞的抑制/细胞毒细胞亚群,即CD3、CD8双阳性细胞群体,可特异性杀伤靶细胞,具有抗病毒、抗肿瘤及重要的调节作用。CD3+CD4+/CD3+CD8+的比值是重要的免疫状态监测指标,用于评价那些自身免疫失调或已知患有免疫缺陷的患者的免疫状态,其比例的降低与免疫系统损害的程度相关[2]。
本文采用流式细胞术进行T淋巴细胞亚群的相对及绝对计数检测,其在方法学上具有无可比拟的优越性。首先,在仪器的使用上,流式细胞仪是对流动的悬浮在液体中的分散细胞进行的自动化检测,它集激光、物体流变学、细胞化学、计算机检测技术为一体,凭借其快速、精确,短时间内可测数千至上万个细胞,并对各个细胞进行多参数定量分析的优势特点,已在各学科领域受到越来越多的重视;其次,在试剂的选择上,本文采取的是四色荧光标记技术,通过CD3、CD4、CD8、CD454种荧光标记抗体,极大限度的精确了淋巴细胞群体及其各亚群。通过流式细胞仪的前向散射信号(FSC)及侧向散射信号(SSC)图谱,可粗步圈出淋巴细胞群体,再通过CD45,这一白细胞的共同抗原,可进一步精确淋巴细胞群体的定位,极大降低了操作者在分析流式数据时存在的主观影响因素,进一步精确各亚群的计数。最后,在绝对计数这一环节,本文采用的是美国BD公司的专利技术-绝对计数管(TruCounttube),利用其管内的已知数量的微球(beads),再加上精确的全血反向加样技术,最终计算出各细胞亚群的绝对含量,这一技术与通过公式(白细胞计数×各群体相对百分含量)计算出的绝对数相比,其精确性是不言而喻的。
本文利用流式细胞术进行健康儿童的T淋巴细胞亚群的相对及绝对计数检测,从结果来看,与文献报道基本一致[3,4],Denney和Kotylo报道的儿童淋巴细胞亚群正常参考值与年龄相关,不同年龄段的儿童,其正常值也不同,本实验室也正进行这方面资料的积累。因此,临床儿科领域应有一套与儿童相关的正常参考值范围,这是毋庸置疑的。希望本文的检测技术与数据结果对临床有所帮助。
【参考文献】
1 AydanIkinciogullari,TanilKendirli,FigenDoga,etal.PeripheralbloodlymphocytesubsetsinhealthTurkishchildren.TheTurkishJournalofPediatrics,2004,46:125-130.
2 左连富.流式细胞术与生物医学.沈阳:辽宁科学技术出版社,1996,323.
3 DenneyT,YogevR,GelmanR,etal.Lymphocytesubsetsinhealthychildrenduringthefirst5yearsoflife.JAMA,1992,267(11):1484-1488.
4 KotyloPK,FinebergNS,FreemanKS,etal.Referencerangesforlymphocytesubsetsinpediatrcpatients.AmJClinPathol,1993,100:111-115.