1.基本原理

    免疫磁珠分选法发起于20世纪70年代，是一种带有磁性高分子聚合微球体，其表面被覆盖有特异性单克隆抗体或第二抗体，可分别与具有特异性抗原的靶细胞或包被了具特异性抗体的靶细胞相结合，再用永久性磁铁吸引出靶细胞，为一种简单、快捷、分选纯度高的细胞分选法。

2.实验操作

    现以德国的MACS免疫磁珠细胞分离器，采用直接阳性分选法分离CD3⁺细胞为例介绍分选CD3⁺细胞技术，本实验所需要的试剂和仪器设备包括：MACS抗人CD3单抗宝贝磁珠试剂，MACS磁座及磁座架，MACS磁柱，PBS-5%PBS-EDTA缓冲液（pH7.2），淋巴细胞分离液（1.077）；水平转子离心机及台式高速离心机、光学显微镜、倒置光学显微镜、荧光显微镜或流式细胞仪（FACS）等。

⑴外周血肝素抗凝，经淋巴细胞分离液分离，得单个核细胞，用PBS-5%PBS-EDTA缓冲液洗涤3遍，计数，调整细胞1*10⁷/mL，备用。

⑵将备用细胞离心弃上清（尽可能不留残液），按10⁷个细胞加入20μL CD3磁珠单抗和80μLPBS-5%PBS-EDTA缓冲液，充分混匀，于6～12℃（冰箱冷藏）置15～30分钟（间中重悬1次）。

⑶加入1000μLPBS-5%PBS-EDTA缓冲液洗涤，离心10000rpm 5min，小心弃上清。

⑷加入500μLPBS-5%PBS-EDTA缓冲液，混匀制细胞悬液（最大细胞浓度可为2*108/mL）备用（注意：在混匀细胞的过程中，防止产生气泡）。

⑸将磁座置于磁座架上，磁柱安装于磁座中，磁柱下放一离心管，用500μLPBS-5%PBS-EDTA缓冲液缓慢流过冲洗磁柱1遍。

⑹更换离心管，将500μL细胞悬液缓慢通过磁柱，收集CD3-细胞，并用500μLPBS-5%PBS-EDTA缓冲液洗涤两遍。

⑺将磁柱移开磁座，再次更换离心管，加500μLPBS-5%PBS-EDTA缓冲液入磁柱，用推进器施力加压，收集CD3+细胞，重复用500μLPBS-5%PBS-EDTA缓冲液照前法洗涤2遍。

⑻将收集得CD3-、CD3+细胞计数，调整细胞浓度备用。

⑼检测细胞纯度可采用免疫荧光法或FACS进行，并计数回收率。