方法
    
　　1、 肿瘤可溶性抗原提取 

　　收集肿瘤细胞于低渗条件下反复冻融4次，以5000r·min-1 离心30min，取上清，用考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量，过滤后冻存备用.    

　　2、 DC及LAK细胞的制备

　　以常规方法分离PBMC，然后用含100mL·L-1 FCS的RPMI1640培养液悬浮，以每孔5×106 个细胞加入6孔板，于37℃，50mL·L-1 CO2 条件下贴壁2h，用预热的培养液轻轻洗出非贴壁细胞，调密度至1×109 ·L-1 ，加IL-2300kU·L-1 ，37℃，50mL·L-1 CO2 条件下培养，每4d换液1次，为LAK细胞.贴壁细胞加完全1640培养液，用100μg·L-1 的GM-CSF及1000U·L-1 的IL-4联合刺激诱导DC分化.DC培养4d，加入GLC-82细胞可溶性抗原100μg·L-1 ，6d加TNF-α（1000kU·L-1 ），PGE2 （10μmol·L-1 ）.10d将DC与LAK细胞混合培养4h，称为DC-LAK.

　3 、细胞表型分析 

　　收集培养7d的细胞，直接（抗CD14 /抗CD45 ，抗CD1 a和抗CD83 mAb）或间接（抗HLA-I，抗HLA-ⅡmAb）免疫荧光染色后，用流式细胞仪分析.
     
　4 、体外细胞毒活性测定 

　　以LAK，DC-LAK为效应细胞，以A549，GLC-82，moser和MCF-7为靶细胞，效靶比按10∶1（效应细胞每孔105 个，靶细胞104 个）加入96孔板，另设单独加效应细胞和单独加靶细胞组，每组设3个复孔，置37℃，50mL·L-1 CO2 孵箱中培养16h，用MTT显色，于波长490nm测各孔吸光度（A）值.
    杀伤率（%）=（1-试验孔A-效应细胞A靶细胞A ）×100%. 

   

　　 结果    
　　1、 DC的制备 

　　DC培养2d即有细胞悬浮，并可看到细胞聚集现象;4d细胞大多呈悬浮生长并聚集成团，可见细胞有毛刺状突起;待加入TNF-α和PGE2 后，细胞逐渐从聚集状态变为分散状态，相差显微镜下可看到细胞表面有大量毛刺状突起，为典型的树突状细胞形态（Fig1）.培养7d DC表达CD1 a阳性率为71.0%，CD83 50.0%，CD14 阳性率低于10.0%，高表达HLA-Ⅰ，HLA-Ⅱ和CD45 ，为典型的DC表型特征（Fig2）.

　　2、体外细胞毒实验